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尿嘧啶核苷酸(UMP)液相色谱检测方法

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尿嘧啶核苷酸与胞苷酸一起构成RNA的嘧啶核苷酸部分,是UTP,CTP合成的前体物质,由乳清酸核苷-5-磷酸经酶催化脱羧而成。它在细胞内的作用,主要是参与核酸合成,维持细胞正常的生理代谢,调节蛋白的转录和基因的表达。分子式 C9H13N2O9P,分子量324.18。对紫外线有强烈吸收性能。由尿嘧啶、核糖和磷酸连接而成。常应用于医疗和健康应用,具有抗衰老和健康维护方面。

检测方法,科研实验室一般采用高效液相色谱(HPLC)或液相色谱质谱联用(LC-MS)。以HPLC为例,简单的介绍一下检测流程。
1.样品处理
精确称取0.2g样品到2ml的离心管中,加入1ml的2.5%高氯酸水溶液,混合振荡1min,低温超声20min,13000r/min离心20min,取上清液0.45um膜过滤,待测。

2.色谱条件
TSKgel ODS-100V的色谱柱,长250mm,内径4.6mm,粒径5um;柱温25℃。VWD检测器,259nm。流动相:0.035mol/L 磷酸二氢钠(pH=6.8)等度洗脱,流速1ml/min,进样量10uL。
3.标准曲线
使用标准品,使用有机溶剂溶解,梯度稀释至少6个点。按色谱条件,测定对应的色谱峰。对色谱峰面积进行积分,结合标准的溶液,绘制标准曲线,得到回归方程。

4.样品测定和计算
将处理好的样品上机测定色谱峰,保留时间和标准品的保留时间是一致的。对色谱峰面积进行积分,根据回归方程,计算出样品中尿嘧啶核苷酸(UMP)含量。


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