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选择液相色谱柱时需要考虑的主要因素

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选择液相色谱柱时需要考虑的主要因素包括:键合相、粒径、孔径、碳载量,下面来一一介绍:
1、键合相:确定了正反相后基本就简单了,正相很简单,我们重点讨论下反相,C18主要分离非极性和弱极性物质,因为是键合硅胶,所以C18也分好几种有常规的如C18-A,耐纯水的OL Apple C18-AQ、耐酸碱的OL Apple C18-EX等,如果发现C18保留很弱,调整流动相也不行,这个时候可以考虑C8甚至C4等。
2、粒径:色谱法追求的是、高分辨、高速等。目前来说亚2um填料或者2UM核壳填料是很理想的模型,基本具备“三高”特征尤其是高速,线速度不在影响分离度,不过附带的缺点就是高压,要升级相应的硬件,成本高昂,需要谨慎考虑。5um填料普遍,目前来说可以胜任各种日常检测,即使有特殊要求,3um色谱填料基本上也能全覆盖,不过该模型下线速度和分离度是成反比的。
3、孔径:目前很多60~300A都有,甚至更高或者更低的。开孔的填料多了个类似分子筛功能,所以选择孔径一定要关注分子量,蛋白(分子量5000以上)一般都需要在160A以上,多肽(分子量上限在3000左右)在120A左右,一般快速柱孔径都很小,可以缩短样品路径。所以上还有无孔硅胶柱子,也很适合蛋白分离,解决蛋白分子量大和太粘稠堵住孔径问题。
4、碳载量:快速柱碳载量很低,如A家等,省时间,省溶剂,但分析部分复杂样品如中药等有点力不从心,这个时候可以考虑英国OL Apple色谱柱,碳载量15~23%,碳载量数值就像河床的水草,越高代表越密集,保留样品能力越强,越有可能分离开难分离物质。


http://www.shtianpu.com.cn/


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