请教一下各位大神！
请问需要针对一种细菌（种特异性）设计三个引物扩增三个不同的靶区域，运用多重pcr的方法。
请问我整个步骤是不是
1、需要从文献里找到xx细菌的保守基因
2、在NCBI 上找到搜索xx菌xx基因的标准序列，然后以标准序列的长度为标准找到长度差不多的所有该序列下载下来。（由于我研究该细菌目的是控制人类患病，所以如果该细菌主要在动物上，但我是不是只要下载从人身上分离的该序列，还是说由该菌人畜共患所以全部选择，如果选择人只有十几二十条这样，这样是不是引物不具有适用性）
3、将下载的序列用clone manager软件进行比对，找出保守性比较好的一段序列，复制到引物设计软件，设计引物就好。（由于我要设计三个引物扩增不同片段，意思是不是我要找三段保守性较好的序列，一段设计一个引物。不然一段序列里就设计三个引物是不是最后扩增出来的都是同一个片段就不是三个靶区域）
另外问一下，听说用16srna设计引物效果不大好，但是有些细菌例如一些非结核分枝杆菌很多文献里只能搜到16srna，如果它们都用16srna是不是不能在分枝杆菌属里将这些非结核分枝杆菌相互区别开来，那我是一定要在文献里找到除此以外的特异基因吗
求解答